МІКРОБІОЛОГІЧНИЙ АНАЛІЗ СИСТЕМИ ПОДАЧІ ВОДИ СТОМАТОЛОГІЧНИХ УСТАНОВОК: ЩО? ДЕ? КОЛИ?

Що таке мікробіологічний аналіз системи подачі води стоматологічних установок?
Де беруть зразки і як їх аналізують?
Коли варто задуматися про проведення такого аналізу?

Ви просто хочете дізнатися, чи живуть у шлангах вашої стоматологічної установки бактерії? У вас виникла певна проблема тухлого запаху від води та скарг клієнтів на присмак? Ви почали використовувати засіб для очищення і дезінфекції системи подачі води і хочете дізнатися, чи добре він справляється?

На всі ці питання відповість мікробіологічний аналіз води.

03.08.2018

Поділитись:

У класичному варіанті він полягає у відборі трьох проб води одночасно (об'ємом близько 5 мл) на виході із системи. Цей аналіз дасть відповідь на питання, яка саме вода потрапляє в рот пацієнта, та чи безпечна вона. Але залежно від конкретної ситуації протокол забору води може змінюватися. Наприклад, іноді потрібно точно визначити, на якому етапі відбувається забруднення води, до потрапляння в установку чи вже безпосередньо в ній, адже дистилят, який найчастіше використовують у стоматологічній практиці, всупереч загальним уявленням, зовсім не обов'язково стерильний. Дистильована вода — це вода, очищена від домішок, а не від мікроорганізмів, і в ній досить тривалий час можуть виживати навіть найчутливіші до умов навколишнього середовища бактерії, віруси, мікроскопічні цвілеві грибки та водорості. Тому, якщо встановлено, що проблема з водою виникла саме в стоматологічній установці, далі слід з'ясувати, на якому етапі вона виникла. Для повної картини необхідно провести такі дослідження:

• Мікробіологічний аналіз дистильованої води до контакту зі стоматологічною установкою (в ідеалі із запакованої тари, в якій вода надходить у клініку)

• Мікробіологічний аналіз дистильованої води з місткості, під'єднаної до стоматологічної установки

• Мікробіологічний аналіз змиву з поверхні місткості для дистильованої води, під'єднаної до стоматологічної установки (забір проводиться за допомогою стерильного зонда з м'яким абразивним покриттям, яке дозволяє зняти з поверхні пластику мікробну біоплівку)

• Мікробіологічний аналіз змиву з внутрішньої поверхні всмоктувальної трубки системи подачі води, зануреної в дистильовану воду (забір проводиться на глибині 5-10 см за допомогою гнучкого стерильного зонда з м'яким абразивним покриттям, яке дозволяє зняти з поверхні пластику мікробну біоплівку)

Малюнок: Відбір зразка з внутрішньої поверхні шланга

Тільки повний комплекс досліджень зможе дати відповідь на питання, на якому етапі відбувається бактеріальне забруднення і як його можна уникнути.

Але як саме проводяться дослідження води та змивів, і чому без правильного визначення бактеріального навантаження розв'язати проблеми забруднень у стоматології не вийде? Про це поговоримо далі.

Відбір і транспортування зразка

Отже, керівництво клініки прийняло рішення про проведення мікробіологічного аналізу. Він починається з відбору зразків, і це — один з ключових моментів. У випадку, якщо аналізується тільки вода на виході зі стоматологічної установки, відібрати зразки в стерильні місткості (шприц, місткість для забору сечі, пластикова пробірка) може кваліфікований співробітник клініки самостійно. Потім їх слід герметично закрити та негайно доправити в лабораторію для аналізу. Врахуйте, що для отримання правильного результату зразки повинні потрапити в руки фахівця мікробіолога не пізніше як через дві години після їх відбору, і протягом цього часу не слід піддавати їх прямій дії сонячного проміння, не нагрівати вище 30 °С, не охолоджувати нижче 5 °С, в іншому випадку бактерії можуть або загинути, або почати розмножуватися, що вплине на результати дослідження.

Якщо потрібно здійснити складніший відбір зразків, проводити його повинен тільки кваліфікований мікробіолог або дезінфекціоніст, який приїде в клініку зі спеціальною термосумкою. До того ж, крім паркану зразків з системи подачі води стоматологічної установки, він зможе оцінити ситуацію і на основі свого досвіду припустити, які ще потенційні джерела забруднення води та повітря є в кабінеті, і взяти додаткові зразки для аналізу.

Крім того, якщо стоматологічна клініка і мікробіологічна лабораторія знаходяться на великій відстані один від одного, і доправити зразки швидко немає можливості, відбір матеріалу слід проводити особливим методом і відразу після відбору помістити їх у спеціальні транспортні середовища.

Малюнок. Середовище для збереження зразків при транспортуванні

Транспортне середовище служить для нетривалого зберігання і транспортування мікроорганізмів. В такому середовищі можуть перевозитися сапрофітні та патогенні бактерії. Транспортні середовища широко застосовуються в санітарній та клінічній мікробіології.

Ключовою характеристикою транспортного середовища є те, що бактерії в ньому повинні виживати, але не розмножуватися. Якщо середовище стимулює розмноження мікроорганізмів, це може перешкодити визначенню бактеріального титру. Транспортні середовища зазвичай мають бідний склад, ненасичені поживними речовинами та джерелами вуглеводів, однак збалансовані по сольовому складу для уникнення лізису бактерій.

До транспортного середовища одна вимога — зберегти зразки та всі мікроорганізми, що потенційно живуть в них до початку аналізу.

Отже, зразки доставлені в лабораторію. Що ж з ними роблять далі?

Визначення якості дистиляту

Перший пункт — визначення рівня рН води. Дистильована вода має кислий рН, в ідеалі від 4,4 до 5,2. Якщо рН отриманого зразка відрізняється від стандарту, це, в першу чергу, говорить про погану якість дистиляту, а в другу — про потенційне бактеріальне забруднення води.

Малюнок: Перші етапи аналізу зразків у мікробіологічній лабораторії

Дослідження води на загальну кількість бактерій

Загальну кількість бактерій у воді визначають шляхом посіву води у стерильні чашки Петрі, в які потім додають розплавлений і охолоджений до 42-45 °С агар. При дослідженні чистої води висівають 1 мл, а при дослідженні потенційно забруднених вод роблять посіви по 1 мл певних розведень води (1:10- 1:100 і більше). Чашки розміщують у термостат при температурі 37 °С на 24 години та після закінчення терміну інкубації підраховують усі колонії, які виросли як на поверхні агару, так і в його глибині, вибираючи чашки, в яких найбільш зручно провести підрахунок колоній.

Малюнок: Бактерії, що виросли на поверхні агару при проведенні аналізу на загальне мікробне забруднення води

Зазвичай таке дослідження — це перший етап мікробіологічного аналізу, і від його результатів залежить, чи будуть потрібні наступні.

Якщо бактерій під час аналізу не виявлено, і рівень рН води відповідає стандартам, то система подачі води стоматологічної установки визнається безпечної для пацієнта і лікаря, а схеми її дезінфекції, якщо такі використовуються, — задовільними та не вимагають коректування.

Розгорнутий мікробіологічний аналіз води

Якщо ж у попередньому аналізі бактерії все ж виявлені, то за бажанням представників клініки дослідження можуть бути продовжені до виявлення джерела забруднення та ідентифікації основного збудника.

Слід зазначити, що в тих випадках, коли загальний аналіз води та повторний більш детальний аналіз проводяться не одночасно, потрібно відбір нового зразка води або змивів з обладнання клініки.

Які ще аналізи зазвичай проводяться в разі виявлення бактеріального забруднення у воді?

1. Виявлення бактерій групи кишкової палички (БГКП). Цей показник часто використовується під час аналізу питної води та для водопровідної води означає, що вона містить фекальне забруднення. У стоматологічній клініці наявність у зразку води БГКП означає, що в системі подачі води присутній біологічний матеріал. Найчастіше — слина, кров і т.д.

2. Визначення наявності спорових форм бактерій. Спорових форм бактерій найважче позбутися при дезінфекції. Вони стійкі до ультрафіолету, спирту, високих температур, і в деяких випадках можуть виживати навіть після автоклавування. Якщо спорові форми бактерій залишаються в системі навіть при використанні засобів дезінфекції, слід змінити схему дезінфекції (вибрати ту, яка призначена для максимального забруднення) або змінити дезінфікувальний засіб.
3. Виявлення мікроскопічних цвілевих грибків. Цвілеві грибки найчастіше розмножуються у вологих місцях, і їх спори переносяться повітрям, у воді без доступу повітря цвіль розмножується повільно. Тому, при визначенні великої кількості спор цвілевих грибків усередині системи подачі води стоматологічної установки, слід шукати джерело її поширення в самому кабінеті (раковини, плінтуси, натяжні стелі, шви між кахлем) або в інших частинах стоматологічної установки, де є волога і доступ повітря (слиновідсмоктувач, пилосос).
4. Визначення стафілококів і стрептококів. Використовується при вивченні спектру бактерій, що викликають бактеріальне забруднення. Наявність стафілококів і стрептококів свідчить про забруднення води біологічним матеріалом і про високий ризик наявності патогенних для людини бактерій.
5. Виявлення певних патогенних бактерій, таких як Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pneumoniae, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumoniae, Mycobacterium tuberculosis та ін. Визначення патогенів до виду зазвичай потрібне в тому випадку, коли пацієнт або лікар інфікований, і місцем інфікування імовірно є стоматологічний кабінет.

Розшифрування результатів

Зазвичай компанії, що займаються контролем мікробіологічної безпеки різних медичних об'єктів, в тому числі й медичних клінік, готові проконсультувати замовників щодо результатів. Але в тому випадку, якщо отримати консультацію з якоїсь причини неможливо, ми розповімо вам, що можуть означати цифри та деякі терміни в отриманих протоколах досліджень.

КУО — колонієтворні одиниці. Фактично це — кількість бактерій, які виявлені у зразку на твердих поживних середовищах в результаті аналізу. Оскільки в цьому випадку з кожної бактерії виростає ціла колонія, яка стає видимою неозброєним оком, то писати про підрахунок бактерій некоректно, тому мікробіологи використовують термін КУО, який означає кількість одиниць бактерій, з яких виросли колонії.

Загальне мікробне число (загальне бактеріальне забруднення, загальне число бактерій або бактеріальне навантаження) — це результат самого загального аналізу на бактеріальне забруднення, про який ми писали вище. Чим нижчий цей показник, тим краще. Для питної води такий показник повинен бути нижчим за 50 КУО/мл, для води, що виходить зі стоматологічної установки, бактеріальне забруднення має дорівнювати 0.

Індекс кишкової палички (колі-індекс, БГКП-індекс) — кількість БГКП, виявлених в 1 л води.

Титр кишкової палички (колі-титр, БГКП-титр) — найменша кількість мілілітрів води, в якій виявляють БГКП.

Варіанти цифрових результатів:

Загальне мікробне число — 1220 КУО/мл. Це означає, що в 1 мл води виявлено 1220 бактерій

Загальне мікробне число — 1220 КУО/мл змиву. Такі результати характерні для зразків, які беруться тампонами. Безпосередньо на тампоні неможливо порахувати кількість бактерій, тому забруднення з тампона змивають стерильним фізіологічним розчином і аналізують отриманий змив.

Загальне мікробне число — 2,3 х 104 КУО/мл. Щоб спростити сприйняття результатів, часто мікробне навантаження вказують у вигляді ступеня. При необхідності цей ступінь легко переводиться в одиниці бактерій. У цьому випадку 2,3 х 10000 = 23000 КУО/мл.

Загальне мікробне число - 106-107 КУО / мл. У тих випадках, коли зразок сильно забруднений, його доводиться розводити в сотні та тисячі разів, що збільшує похибку результатів, і тоді мікробну навантаження виражають у вигляді діапазону значень «від» і «до».

Загальне мікробне число — • 101 КУО/мл. Це означає, що мікробіолог взяв для аналізу 100 мікролітрів зразка (1/10 частина мілілітра), і в ній бактерій не виявлено. Фактично це означає, що зразок стерильний, але писати «0» вважається некоректним, тому що досліджувався не весь мілілітр зразка, а тільки його десята частина.

Експрес тести на бактеріальне навантаження. «Навіщо нам лабораторія? Ми й самі зможемо!»

Прогрес не стоїть на місці, а стрімко рухається вперед, намагаючись спростити все, що тільки можна. У плані визначення бактеріального забруднення прогрес помітний особливо, і зараз вже доступні два типи систем оцінки, які дозволять проводити аналізи прямо в стоматологічній клініці. Перший — це всілякі пластини, чашки, тест-комплекти і т.д. Зазвичай такі тест-системи просякнуті різними діагностичними середовищами для бактерій або розділені на осередки з різними середовищами, в кожну з яких потрібно додати зразок. При цьому суть аналізу не відрізняється від лабораторного: зразок інкубується при постійній температурі, бактеріальне забруднення оцінюється за наявністю видимого росту мікроорганізмів.

Системи для діагностики бактеріального забруднення, які можна використовувати прямо в клініці

Мінусів у цього типу систем два. Перший — потрібна наявність термостата, якого, найчастіше, в стоматологічній клініці немає. І другий — подібні системи виробляються виключно за кордоном, і вартість однієї тест-системи, тобто, аналізу одного зразка, може бути в десять разів вище, ніж лабораторне дослідження. До того ж, результати подібних «домашніх» методів тестування не приймають санітарні служби.

Ще один більш модний зараз варіант — портативний тестер бактеріального навантаження. Нижче на малюнку показана одна з найпоширеніших моделей, яка продається на сайті amazon.com. Як бачите, його вартість — майже дві тисячі доларів, і це тільки зі стартовим комплектом тест-смужок, кожний наступний комплект коштуватиме вам додатково 450-500 доларів.

Але проблема цієї системи навіть не в її ціні, а в тому, наскільки коректні результати вона видає. На відміну від класичного мікробіологічного аналізу, такий портативний прилад не може визначити, жива перед ним бактерія чи мертва, ціла вона чи це — лише її частина. Суть дослідження, залежно від типу приладу, полягає у визначенні або ДНК, або білка, або білка і ДНК разом (в дорожчих моделях). Тобто, по суті, не мікробного, а біологічного забруднення. Наявності в зразку біологічного матеріалу. Тому якщо опустити тест-смужку в стерилізовану слину, а потім помістити її в прилад, то в деяких випадках можна отримати дуже високі показники мікробного навантаження, хоча насправді жодної живої бактерії в зразку не буде.

Звичайно, велика спокуса потерти поверхню ватною паличкою, встромити її в красивий маленький прилад і через п'ять секунд отримати результат, адже це так ефектно виглядає в рекламі! Але на ділі за це задоволення доведеться заплатити кілька тисяч доларів, регулярно витрачатися на його перевірку і калібрування, а результати, що найприкріше, можуть вказувати на що завгодно.

І на закінчення

Як бачите, різновидів мікробіологічних тестів досить багато, і це тільки основні їх види, список можна продовжувати майже до безкінечності. Але класичні лабораторні дослідження, як показує практика, поки що найнадійніші та дешевші. А головне — найінформативніші. Чи потрібно замовляти їх усі та чи буде розгорнута видова ідентифікація бактерій більш показова, ніж просто загальне мікробне навантаження? Скоріш за все ні. Коли мова йде про стоматологічні установки та про воду, яка потрапляє в рот пацієнтів і контактує з пошкодженими поверхнями, задовільним результатом можна вважати тільки її повну стерильність. Досвідчений мікробіолог, глянувши на чашку Петрі зі звичайним агаром, тобто на аналіз на загальне бактеріальне забруднення, вже зможе приблизно сказати, чи це плісняві форми бактерій, що залетіли з потоком повітря під час забору зразків, спорові бактерії, чи у воді наявні мікроорганізми різних груп, що явно вказує на наявність біоплівки на внутрішніх стінках шланга. І в цій ситуації витрачати гроші, а головне — час, на проведення додаткових аналізів і «поіменного» виявлення збудників сенсу немає. Потрібно діяти і якомога швидше. Використовувати дезінфектанти, змінювати протоколи очищення шлангів, шукати нового постачальника дистильованої води. І вже потім, після внесених змін, знову віддати воду із системи на аналіз. Знову ж таки, для початку — на найпростіший.

Проводити детальні мікробіологічні дослідження є сенс тільки в одній ситуації: коли всі заходи щодо дезінфекції проводяться регулярно і якісно, ​​вода постачається стерильною, а інфекція в системі подачі води все одно є. Ось тоді вже варто витратити час і зусилля і провести справжнє «розслідування», щоб з'ясувати, де може бути джерело інфекції і які конкретно бактерії забруднюють воду.